1.0目標(biāo)
制定媒體準(zhǔn)備程序。
2.0范圍
本標(biāo)準(zhǔn)操作程序適用于微生物學(xué)部分的培養(yǎng)基制備。
3.0責(zé)任
微生物學(xué)家
4.0問責(zé)制
質(zhì)量檢查和質(zhì)量控制主管
5.0程序
5.1微生物培養(yǎng)基的制備和使用方法
5.1.1使用Hi-Media的脫水培養(yǎng)基。在使用媒體之前，請(qǐng)先檢查內(nèi)部使用日期。
5.1.2包裝上提供了準(zhǔn)備介質(zhì)的方法。它給出了每升注射用水要懸浮的粉末量。
5.1.3稱量所需量的粉末，并添加所需量的新鮮收集的WFI。記下重量，充分混合以溶解，并在滅菌前檢查培養(yǎng)基的pH值。按照包裝上的說明消毒介質(zhì)。高壓滅菌后；讓介質(zhì)冷卻至55-60°C，在約55±5°C的溫度下存放或根據(jù)要求倒入板中。
5.1.4此存儲(chǔ)的媒體可以使用7天。保持記錄媒體準(zhǔn)備的使用和格式破壞。
5.1.5肉湯培養(yǎng)基
5.1.5.1稱重脫水培養(yǎng)基的量，并根據(jù)包裝上的說明添加WFI。記下每種介質(zhì)的重量。
5.1.5.2將固體溶解在WFI中，輕輕加熱（如有必要）以形成均勻的溶液，冷卻至室溫并通過使用0.1 M HCl或0.1M NaOH溶液調(diào)節(jié)所需的pH（在各個(gè)介質(zhì)包裝上指定）。
5.1.5.3在適當(dāng)?shù)臒炕蛟嚬苤蟹峙溥m量的培養(yǎng)基。用不吸水的棉布塞好，再用鋁箔紙包好。
5.1.5.4按照包裝上的說明消毒培養(yǎng)基。高壓滅菌應(yīng)在121°C，15磅/英寸²的條件下進(jìn)行20分鐘或相應(yīng)介質(zhì)指定的時(shí)間。
5.1.5.5滅菌后，將培養(yǎng)基冷卻至室溫，使用pH指示條或pH計(jì)再次檢查pH并進(jìn)行分析。
5.1.5.6將滅菌的肉湯培養(yǎng)基保存在25°C以下直至使用。
5.1.6瓊脂培養(yǎng)基
5.1.6.1按照培養(yǎng)基包裝上給出的方向稱量WFI中脫水培養(yǎng)基的量。記下每種介質(zhì)的重量。
5.1.6.2將固體溶解在WFI中，輕輕加熱（如果需要）以形成均勻的溶液，冷卻至室溫，使用0.1 M HCl或0.1 M NaOH溶液調(diào)節(jié)所需的pH（在相應(yīng)的介質(zhì)包裝上指定）。
5.1.6.3在適當(dāng)?shù)臒恐蟹峙溥m量的培養(yǎng)基。用不吸水的棉布塞好，再用鋁箔紙包好。
5.1.6.4按照包裝上的說明消毒培養(yǎng)基。高壓滅菌應(yīng)在121°C，15磅/英寸²的條件下進(jìn)行20分鐘或相應(yīng)介質(zhì)指定的時(shí)間。
5.1.6.5滅菌后，將介質(zhì)冷卻至60ºC。
5.1.6.6將熔融介質(zhì)存放在保持在55-60ºC的烤箱中，直至進(jìn)一步使用。
5.1.6.7在某些情況下，例如亞硒酸鹽半胱氨酸肉湯，請(qǐng)勿對(duì)溶液進(jìn)行高壓滅菌。制備溶液后，按照培養(yǎng)基包裝上給出的滅菌步驟進(jìn)行。然后冷卻至室溫并使用。
5.1.6.7對(duì)于瓊脂培養(yǎng)基，高壓滅菌后，將其冷卻至約45-50°C，然后將培養(yǎng)基無菌倒入無菌培養(yǎng)皿中，每盤15至20 ml。使這些板固化。關(guān)閉板，將其倒置并保存在BOD培養(yǎng)箱中（低于25°C）。
5.1.6.8一天中準(zhǔn)備的所有介質(zhì)應(yīng)分配相應(yīng)的批號(hào)。這些批號(hào) 應(yīng)在媒體準(zhǔn)備，實(shí)用程序和銷毀記錄中輸入。
5.2分配批號(hào)
在一個(gè)高壓滅菌循環(huán)中準(zhǔn)備的所有介質(zhì)應(yīng)具有各自的批號(hào)，并且應(yīng)將這些批號(hào)輸入到介質(zhì)準(zhǔn)備和記錄中。應(yīng)按以下方式分配高壓滅菌介質(zhì)的批號(hào)：
XXX / ZZZZZ
其中XXX：每年高壓
滅菌器裝載號(hào)，從001開始。
ZZZZZ：制造商提供的介質(zhì)批號(hào)。
在2小時(shí)內(nèi)對(duì)微生物培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌。從他們的準(zhǔn)備。
5.3微生物培養(yǎng)基的儲(chǔ)存
準(zhǔn)備的培養(yǎng)基：
肉湯：存放于25°C以下。
熔融瓊脂培養(yǎng)基：在55-60°C之間儲(chǔ)存
制備的板：在25°C以下在BOD中儲(chǔ)存
5.4媒體測(cè)試：
5.4.1 pH：在一次運(yùn)行中，從各種營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中制備一次，高壓滅菌后取樣，然后冷卻至室溫。用電極測(cè)量固體介質(zhì)（固化前）和液體介質(zhì)的pH值。記錄結(jié)果。如果測(cè)得的pH值不符合要求，則為同一批次的另外兩個(gè)容器確定pH值。如果兩次重復(fù)的結(jié)果均在限值范圍內(nèi)，則可以將中等批次的樣品用于測(cè)試。如果結(jié)果不符合要求，則不得使用該批次并將其丟棄。
5.4.2預(yù)孵育
將培養(yǎng)基預(yù)孵育48小時(shí)。孵育后，對(duì)介質(zhì)進(jìn)行物理檢查以檢查是否存在任何污染（宏觀證據(jù)的增長(zhǎng)），如果存在污染，請(qǐng)按照SOP丟棄所有介質(zhì)以棄置介質(zhì)。
5.4.3促進(jìn)生長(zhǎng)的性質(zhì)
根據(jù)SOP，使用指示生物測(cè)試選擇性和非選擇性培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)特性。
6.0縮寫
SOP：標(biāo)準(zhǔn)操作程序
QA：質(zhì)量保證
QC：質(zhì)量控制
BOD：生物需氧量
M：摩爾比
WFI：注射用水
