濕熱滅菌方法的一種。是微生物培養(yǎng)中**重要的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水在煮沸時所形成的蒸汽不能擴散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密閉的情況下，隨著水的煮沸，蒸汽壓力升高，溫度也相應增高。高壓蒸汽是**有效的滅菌法，能迅速地達到完全徹底
滅菌。一般在15磅/英寸2
壓力下（121.6℃），15～30分鐘，所有微生物包括芽孢在內(nèi)都可殺死。它適用于對一般培養(yǎng)基和玻璃器皿的滅菌。
進行高壓蒸汽滅菌的容器是高壓
蒸汽滅菌鍋。高壓
蒸汽滅菌鍋是一個能耐壓又可以密閉的金屬鍋，有立式與臥式兩種。熱源可以用電熱、煤氣、蒸汽等。鍋上裝有壓力表，有的還裝有溫度計，能及時了解鍋內(nèi)壓力及溫度。鍋上還設有排氣口，其作用是在密閉之前，利用蒸汽將鍋內(nèi)的冷空氣排凈，另外還裝有安全活門，如果壓力超過一定限度，活門即可自動打開，放出過多的蒸汽。
高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸汽不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之增加。在0.1MPa的壓力下，鍋內(nèi)溫度達121℃。在此蒸汽溫度下，可以很快殺死各種細菌及其高度耐熱的芽孢。
注意:完全排除鍋內(nèi)空氣，使鍋內(nèi)全部是水蒸氣，滅菌才能徹底。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。常用方法是：關(guān)閉放氣閥，通電后，待壓力上升到0.05MPa時，打開放氣閥，放出空氣，待壓力表指針歸零后，再關(guān)閉放氣閥。關(guān)閥再通電后，壓力表上升達到0.1MPa時,開始計時，維持壓力0.1～0.15MPa 20分鐘。
到達保壓時間后，即可切斷電源，在壓力降到0.5MPa，可緩慢放出蒸氣，應注意不要使壓力降低太快，以致引起激烈的減壓沸騰，使容器中的液體四溢。當壓力降到零后，才能開蓋，取出培養(yǎng)基，擺在平臺上，以待冷凝。不可久不放氣，引起培養(yǎng)基成分變化，以**培養(yǎng)基無法擺斜面 。一旦放置過久，由于鍋爐內(nèi)有負壓，蓋子打不開，只要將放氣閥打開，大氣壓入，內(nèi)外壓力平衡，蓋子便易打開了。
對高壓滅菌后不變質(zhì)的物品，如無菌水、栽培介質(zhì)、接種用具，可以延長滅菌時間或提高壓力。而培養(yǎng)基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長時間
(1)準備。將
滅菌鍋放在2000瓦電爐上，或放在有足夠火力的煤氣灶、煤爐上，向鍋內(nèi)加水**水位標記線為止。將準備滅菌的培養(yǎng)基及空玻璃器皿用牛皮紙包好，裝入鍋內(nèi)套層中，物品放置不宜過多，過擠，鍋內(nèi)應留出三分之一空間。然后蓋嚴鍋蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，關(guān)閉鍋蓋上的氣閥。
(2)加熱。點燃熱源，開始加熱。當鍋蓋上的壓力表達到0.5千克/厘米2
時，打開放氣閥，排凈鍋內(nèi)冷空氣，直到壓力表回降到“0”時，關(guān)閉氣閥，繼續(xù)加熱。當壓力表上升到所需壓力時（一般為1千克/厘米2
），開始計算滅菌時間。此時應適當關(guān)小熱源，不斷調(diào)節(jié)熱源大小，使壓力始終維持在所需數(shù)值上，達到保壓時間后，停止加熱，使
滅菌鍋內(nèi)壓力自然下降。(3)結(jié)束。待壓力表降**“0”時，擰松螺旋，半開鍋蓋，用鍋內(nèi)余熱烘干蓋紙，10分鐘后取出滅菌物品。
(4)注意事項。在滅菌過程中，應注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會影響滅菌效果，達不到徹底滅菌的目的。由于高壓蒸汽滅菌時，要使用溫度高達120℃、兩個大氣壓的過熱蒸汽，操作時，必須嚴格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。
采用的方法是高壓蒸氣滅菌。要求在滅菌過程中排出鍋內(nèi)的冷空氣，這是為什么呢? 高壓蒸氣滅菌的原理，是利用一定壓力提高水的沸點，使溫度超過100℃ ，形成高壓高溫水蒸汽，迅速穿透細菌細胞壁而使細菌的蛋白質(zhì)變性以達到滅菌的目的。在使用高壓蒸氣滅菌時，
滅菌鍋內(nèi)的冷空氣的排出是否完全，極為重要，因為空氣的膨脹壓大于水蒸氣的膨脹壓，所以當水蒸氣中含有空氣時，含空氣蒸氣的溫度低于飽和水蒸氣的溫度。滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時，壓力與溫度的關(guān)系如下表1。
表1 滅菌鍋內(nèi)留有不同分量空氣時，壓力與溫度的關(guān)系
